HSP 78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413434

概要

CLPBは、ヒトのミトコンドリアAAA+シャペロンであるHSP78をコードしており、マトリックス内でミトコンドリアHSP70/HSP60系と協調して、ミスフォールドしたタンパク質や凝集したタンパク質を引き抜き、再フォールディングさせるタンパク質脱凝集因子として機能します。ATP依存的にタンパク質複合体を再構築することで、CLPBはミトコンドリアのプロテオスタシス、呼吸鎖の健全性、ならびにプロテオトキシックストレスや酸化ストレスに対する細胞の適応を支えます。CLPBの機能不全はミトコンドリア病様の表現型や代謝恒常性の変化と関連づけられており、エネルギー産生、ストレス応答、品質管理を制御する経路における重要性が示唆されています。ミトコンドリアのタンパク質監視機構の一要素として、HSP78は、酸化的リン酸化の障害、レドックスバランスの破綻、ストレス誘導性アポトーシスシグナルなどに関わる文脈でしばしば研究されています。

HSP 78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLPB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLPB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLPBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HSP 78タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HSP 78シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLPB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HSP 78の機能に不可欠なCLPBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLPBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HSP 78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHSP 78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLPB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HSP 78 HDRプラスミド（h）および HSP 78 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLPBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLPB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。