HSP 40-4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403819-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSP 40-4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h) e il HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNAJA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSP 40-4 Antibody (KA2A5.6): sc-59554
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSP 40-4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403819-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 40-4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403819-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAJA1 codifica il co-chaperone umano della famiglia HSP40 HSP 40-4 (noto anche come Hdj2), una proteina contenente il dominio J che stimola l’attività ATPasica di HSP70 per supportare il ripiegamento, il ripiegamento corretto e il controllo qualità delle proteine. Attraverso interazioni con HSP70 e con le proteine client, DNAJA1 contribuisce alla proteostasi nel citosol e alle interfacce associate agli organelli, influenzando le risposte allo stress, il traffico proteico e vie di degradazione come il sistema ubiquitina–proteasoma. La disregolazione delle reti di chaperoni che coinvolgono DNAJA1 è stata collegata a un’alterata tolleranza cellulare allo stress proteotossico, con rilevanza per la biologia del cancro e per la neurodegenerazione, dove il carico di proteine mal ripiegate e la segnalazione da stress sono particolarmente pronunciati. La funzione di DNAJA1 è inoltre studiata nel contesto delle interazioni ospite–patogeno e della stabilità delle vie di segnalazione, a riflettere il suo ruolo nel mantenimento di complessi proteici funzionali.
HSP 40-4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNAJA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNAJA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNAJA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNAJA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.