HS3ST5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-415157

Visão geral

HS3ST5 codifica a heparan sulfato–glucosamina 3-O-sulfotransferase 5, uma enzima residente no Golgi que catalisa a 3-O-sulfatação de resíduos de glucosamina durante a biossíntese de proteoglicanos de heparan sulfato. Essa modificação ajuda a definir a estrutura fina do heparan sulfato, moldando propriedades de ligação a ligantes que influenciam a comunicação célula–célula, a adesão e a distribuição de morfogênios na matriz extracelular. Ao modular interações dependentes de heparan sulfato, o HS3ST5 pode afetar vias de sinalização como FGF, Wnt, Hedgehog e redes de quimiocinas que regulam o desenvolvimento e a homeostase tecidual. Padrões desregulados de sulfatação do heparan sulfato têm sido associados à alteração da disponibilidade de fatores de crescimento, à inflamação e à remodelação do microambiente tumoral, tornando o HS3ST5 relevante para estudos mecanísticos de alterações de glicosaminoglicanos associadas a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HS3ST5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HS3ST5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HS3ST5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HS3ST5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HS3ST5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HS3ST5 para a investigação da sinalização de HS3ST5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HS3ST5 críticos para a função HS3ST5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HS3ST5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HS3ST5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HS3ST5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HS3ST5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HS3ST5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HS3ST5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HS3ST5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HS3ST5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.