HS3ST5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-415157

Übersicht

HS3ST5 kodiert die Heparansulfat-Glucosamin-3-O-Sulfotransferase 5, ein im Golgi lokalisiertes Enzym, das während der Biosynthese von Heparansulfat-Proteoglykanen die 3-O-Sulfatierung von Glucosaminresten katalysiert. Diese Modifikation trägt zur Ausprägung der Feinstruktur von Heparansulfat bei und formt dessen Ligandenbindungs-Eigenschaften, die die Zell-Zell-Kommunikation, Adhäsion und die Verteilung von Morphogenen innerhalb der extrazellulären Matrix beeinflussen. Durch die Modulation heparansulfatabhängiger Interaktionen kann HS3ST5 Signalwege wie FGF-, Wnt-, Hedgehog- und Chemokin-Netzwerke beeinflussen, die Entwicklung und Gewebehomöostase regulieren. Dysregulierte Sulfatierungsmuster von Heparansulfat wurden mit einer veränderten Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren, Entzündungen und dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, wodurch HS3ST5 für mechanistische Studien krankheitsassoziierter Veränderungen von Glykosaminoglykanen relevant ist.

Das HS3ST5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HS3ST5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HS3ST5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HS3ST5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HS3ST5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HS3ST5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HS3ST5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HS3ST5-Exone abzielen, die für die HS3ST5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HS3ST5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HS3ST5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HS3ST5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HS3ST5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HS3ST5 HDR-Plasmid (h) und HS3ST5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HS3ST5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HS3ST5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.