HS3ST2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409766

Übersicht

HS3ST2 kodiert die Heparansulfat-Glucosamin-3-O-Sulfotransferase 2, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die 3-O-Sulfatierung von Heparansulfatketten katalysiert. Dadurch entstehen seltene Sulfatierungsmotive, die die Ligandenbindung und die Spezifität der Signalübertragung modulieren. Indem HS3ST2 Heparansulfat–Protein-Interaktionen formt, beeinflusst es die Biologie der extrazellulären Matrix und reguliert Signalwege wie FGF-, WNT-, VEGF- und chemokingesteuerte Signalgebung, die Zelladhäsion, Migration und Gewebemusterbildung steuern. Eine veränderte HS3ST2-Expression oder epigenetische Stilllegung wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird im Zusammenhang mit Invasion, metastaseassoziiertem Umbau des Mikromilieus und fehlregulierter Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktoren untersucht. Seine Rolle in der Heparansulfat-Biosynthese verknüpft es zudem mit umfassenderen Fragestellungen der Entwicklungsbiologie und der Entzündung, bei denen Sulfatierungsmuster die Rezeptoraktivierung und die Ausbildung von Gradienten feinabstimmen.

Das HS3ST2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HS3ST2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HS3ST2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HS3ST2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HS3ST2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HS3ST2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HS3ST2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HS3ST2-Exone abzielen, die für die HS3ST2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HS3ST2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HS3ST2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HS3ST2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HS3ST2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HS3ST2 HDR-Plasmid (h) und HS3ST2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HS3ST2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HS3ST2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.