Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Hrs Plasmide Double Nickase (m): sc-420851-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hrs Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hrs Double Nickase Plasmid (m) e il Hrs Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hgs. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hrs Antibody (C-7): sc-271455
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hrs Plasmide Double Nickase (m) | sc-420851-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hrs Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420851-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Hgs codifica Hrs, un componente centrale del complesso ESCRT-0 che riconosce i cargo ubiquitinati e avvia lo smistamento endosomiale verso i corpi multivescicolari e la degradazione lisosomiale. Hrs coordina la downregolazione dei recettori tirosina-chinasici e la terminazione del segnale, collegando l’endocitosi a vie quali la segnalazione EGFR/MAPK e PI3K–AKT, e contribuisce alla maturazione degli endosomi e al traffico di membrana. Attraverso i suoi ruoli nel clustering dei cargo e nel reclutamento di ESCRT, Hrs influenza il crosstalk tra autofagia e compartimento endo-lisosomiale e la proteostasi. Un traffico dipendente da Hrs deregolato è stato associato ad alterazioni della segnalazione recettoriale e a processi neurodegenerativi e oncogenici, rendendo Hgs un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione endosomiale e sul turnover proteico.
Hrs Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hgs nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hgs. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hgs. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hgs interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.