Hrs CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437306

概要

Hrs（hepatocyte growth factor–regulated tyrosine kinase substrate；HGSとも呼ばれる）はエンドソームのソーティングに関わるタンパク質で、ESCRT-0複合体の一員としてユビキチン化された膜タンパク質を認識し、それらを多胞体（multivesicular body）へと輸送してリソソーム分解へ導きます。エンドソーム成熟と受容体ダウンレギュレーションを協調して制御することで、Hrsは受容体型チロシンキナーゼをはじめとする細胞表面受容体からのシグナル出力に影響し、増殖・分化・ストレス応答を制御する経路を形作ります。このタンパク質は、膜タンパク質のターンオーバー、エンドソームからリソソームへの輸送、プロテオスタシスといった過程に不可欠であり、神経変性、炎症、がん性シグナルの破綻に関する研究でも頻繁に扱われます。ラット系では、Hrsを撹乱することにより、エンドソームソーティングの変化が受容体の運命決定や下流経路の再配線にどのように影響するかを解明するための機構研究が可能になります。

Hrs CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hrsタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hrsシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hrsの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hrs CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびHrs CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hrs HDRプラスミド（r）および Hrs HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。