Partículas Lentivirales de Activación (h) HoxA9: sc-401583-LAC

HOXA9 codifica el factor de transcripción con homeobox HoxA9, un regulador clave del patrón embrionario anteroposterior y de los programas de las células madre y progenitoras hematopoyéticas. HoxA9 controla el compromiso de linaje, la autorrenovación y la diferenciación mediante la unión al ADN específica de secuencia y las interacciones cooperativas con cofactores como PBX y MEIS, configurando redes transcripcionales que influyen en la progresión del ciclo celular y en el estado de la cromatina. La expresión aberrante de HOXA9 se asocia fuertemente con una diferenciación mieloide alterada y con circuitos transcripcionales leucemogénicos, y con frecuencia se estudia junto con reguladores epigenéticos upstream que modulan los loci HOX. En consecuencia, HOXA9 se utiliza ampliamente como un nodo modelo para investigar la regulación génica del desarrollo, la reprogramación transcripcional y las dependencias de vías oncogénicas.

Las partículas de activación lentiviral HoxA9 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HOXA9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HoxA9 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HOXA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HoxA9. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HOXA9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.