Plásmido CRISPR de Activación (h) HNRNPA1L2: sc-403579-ACT

HNRNPA1L2 codifica un factor similar a la ribonucleoproteína nuclear heterogénea A1, implicado en la unión a ARN y en la regulación génica posranscripcional, incluida la escisión y empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad del ARNm y el transporte nucleocitoplasmático. Como parte de complejos ribonucleoproteicos, HNRNPA1L2 está en posición de influir en la elección de isoformas de transcritos y en el acoplamiento entre la transcripción y el procesamiento del ARN, modulando programas de expresión génica de manera dependiente del contexto. La regulación alterada de proteínas de la familia hnRNP se ha asociado con un metabolismo del ARN desregulado, patrones de splicing aberrantes y respuestas de estrés celular relevantes para la biología del cáncer y la investigación en neurodegeneración. Estas características hacen de HNRNPA1L2 una diana útil para desentrañar redes de procesamiento de ARN y sus efectos posteriores sobre la diversidad del proteoma.

HNRNPA1L2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPA1L2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HNRNPA1L2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPA1L2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPA1L2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HNRNPA1L2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPA1L2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HNRNPA1L2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HNRNPA1L2 en células tumorales con expresión de HNRNPA1L2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.