hnRNP Q Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425140-ACT

Il gene **Syncrip** nel topo codifica la **ribonucleoproteina nucleare eterogenea Q (hnRNP Q)**, una proteina legante l’RNA che coordina la regolazione genica post-trascrizionale controllando lo splicing del pre-mRNA, la stabilità dell’mRNA, la localizzazione subcellulare e la traduzione. hnRNP Q partecipa all’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici e contribuisce a plasmare programmi di espressione genica legati allo sviluppo neuronale, alla funzione sinaptica e alle risposte allo stress cellulare. Attraverso interazioni con i macchinari di processamento e trasporto dei trascritti, Syncrip influenza vie del metabolismo dell’RNA spesso alterate nella neurodegenerazione, nel rimodellamento dell’espressione genica associato al cancro e in altri disturbi caratterizzati da un’omeostasi dell’RNA deregolata. Il suo ampio profilo di legame a livello di trascrittoma lo rende un nodo utile per studiare le reti di regolazione dell’RNA e il controllo, a livello di via, della produzione proteica.

hnRNP Q Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Syncrip senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP Q Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Syncrip nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Syncrip, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP Q. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Syncrip nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP Q nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP Q nelle cellule tumorali con espressione di Syncrip silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.