hnRNP Q Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425140-ACT

O Syncrip de camundongo codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea Q (hnRNP Q), uma proteína ligante de RNA que coordena a regulação gênica pós-transcricional por meio do controle do splicing do pré-mRNA, da estabilidade do mRNA, da localização subcelular e da tradução. A hnRNP Q participa da montagem de complexos ribonucleoproteicos e ajuda a moldar programas de expressão gênica ligados ao desenvolvimento neuronal, à função sináptica e às respostas celulares ao estresse. Por meio de interações com a maquinaria de processamento e transporte de transcritos, o Syncrip influencia vias do metabolismo de RNA que frequentemente estão alteradas na neurodegeneração, na remodelação da expressão gênica associada ao câncer e em outros distúrbios com homeostase de RNA desregulada. Seu amplo perfil de ligação em todo o transcriptoma o torna um nó útil para estudar redes regulatórias de RNA e o controle, em nível de vias, da produção proteica.

hnRNP Q O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Syncrip sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP Q O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Syncrip em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Syncrip, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP Q. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Syncrip nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP Q no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP Q em células tumorais com expressão de Syncrip silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.