hnRNP M CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401670-ACT

HNRNPM は、ヘテロ核リボヌクレオプロテイン M（hnRNP M）をコードしており、hnRNP M は新生転写産物に結合して pre-mRNA のプロセシング、選択的スプライシング、mRNA 成熟を制御する RNA 結合タンパク質です。hnRNP M はスプライソーム関連の RNA 代謝に関与し、細胞増殖・分化・ストレス適応的な遺伝子発現といった細胞状態プログラムに影響し得る転写産物アイソフォームの選択に作用します。HNRNPM 依存的なスプライシングネットワークの破綻は、上皮間葉転換（EMT）の変化や、複数の疾患状況で観察される異常な RNA プロセシングのシグネチャーと関連づけられており、スプライシング因子の摂動が経路レベルで及ぼす影響を研究するうえで有用な結節点となります。hnRNP M の発現量を実験的に操作することで、アイソフォーム切り替えイベント、RNA–タンパク質相互作用の依存性、そしてトランスクリプトーム再構成によって駆動される下流シグナル変化をマッピングできます。

hnRNP M CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HNRNPMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP M CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HNRNPM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHNRNPM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP Mの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHNRNPM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP M依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHNRNPM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP M経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。