Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A3 (h): sc-418346

Présentation

HNRNPA3 code pour la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A3 (hnRNP A3), une protéine de liaison à l’ARN qui s’associe aux pré-ARNm et aux transcrits matures afin de réguler l’épissage alternatif, la stabilité des ARNm et le transport nucléo-cytoplasmique. hnRNP A3 participe à l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques et contribue à coordonner des programmes d’expression génique liés au traitement de l’ARN et à la traduction. La dérégulation des membres de la famille hnRNP est fréquemment associée à des altérations du métabolisme de l’ARN, de la dynamique des granules de stress et des voies de protéostasie. Ces processus sont pertinents pour la biologie des maladies, où une régulation post-transcriptionnelle aberrante et des protéines liant l’ARN sujettes à l’agrégation contribuent au dysfonctionnement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HNRNPA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HNRNPA3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HNRNPA3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP A3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HNRNPA3 pour l'étude de la signalisation de hnRNP A3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HNRNPA3 essentiels à la fonction de hnRNP A3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HNRNPA3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le hnRNP A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HNRNPA3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP A3 plasmide HDR (h) et le hnRNP A3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HNRNPA3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HNRNPA3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.