hnRNP A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420895-ACT

O gene murino Hnrnpa1 codifica a hnRNP A1, uma proteína abundante de ligação a RNA que se associa a pré-mRNAs para coordenar o splicing alternativo, a exportação de mRNA, a estabilidade e a tradução. A hnRNP A1 também transita entre o núcleo e o citoplasma e contribui para a dinâmica dos grânulos de estresse e para o controle de qualidade de RNAs, conectando o processamento de RNA às respostas celulares ao estresse. Por meio de uma regulação ampla do transcriptoma, a hnRNP A1 influencia vias como a função do spliceossomo, respostas a danos no DNA e programas de sinalização relacionados ao crescimento. A desregulação da expressão ou da localização da hnRNP A1 tem sido associada a padrões de splicing alterados e a distúrbios do metabolismo de RNA relevantes para a neurodegeneração e a biologia do câncer, tornando-a um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de regulação pós-transcricional.

hnRNP A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hnrnpa1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hnrnpa1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hnrnpa1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hnrnpa1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP A1 em células tumorais com expressão de Hnrnpa1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.