HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420893
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HNF-6 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico HNF-6, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HNF-6 Anticorpo (G-10): sc-376167
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420893 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Onecut1 codifica o fator de transcrição homeobox HNF-6, um regulador-chave da diferenciação de tecidos derivados do endoderma em camundongos, incluindo as linhagens pancreática, hepática e biliar. O HNF-6 liga-se a elementos cis-regulatórios para coordenar programas transcricionais que controlam a morfogênese epitelial, o desenvolvimento de ductos e decisões de destino celular, e interage funcionalmente com as vias de sinalização Notch, Wnt/β-catenina e TGF-β durante a organogênese e a homeostase tecidual. Alterações na atividade de Onecut1 têm sido associadas a defeitos no desenvolvimento endócrino do pâncreas e no padrão dos ductos, tornando-o relevante para estudos de disfunção metabólica e fenótipos do desenvolvimento. Em sistemas experimentais, a perturbação de Onecut1/HNF-6 é usada para dissecar redes transcricionais que conectam o estado da cromatina à especificação de linhagem e à maturação de órgãos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Onecut1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Onecut1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Onecut1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HNF-6.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Onecut1 para a investigação da sinalização de HNF-6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Onecut1 críticos para a função HNF-6
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Onecut1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Onecut1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo HNF-6 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR HNF-6 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Onecut1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Onecut1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.