HNF-3γ Double Nickaseプラスミド (h): sc-401720-NIC

FOXA3は、内胚葉の発生過程においてクロマチンのアクセス性を調節し、組織特異的な転写プログラムを統合的に制御するフォークヘッド／ウイングドヘリックス型転写因子である肝細胞核因子3ガンマ（HNF-3γ）をコードする。分化細胞では、HNF-3γは核内受容体経路や肝細胞転写因子経路との相互作用を介して、糖・脂質代謝、異物（ゼノバイオティクス）処理、分泌機能を制御する肝臓および消化管上皮の遺伝子ネットワークに寄与する。FOXA3の発現や制御回路の変化は、肝胆道系および消化管疾患でみられる代謝恒常性の破綻や系譜状態（ラインエージュ・ステート）の変化と関連づけられており、細胞アイデンティティの転写制御を研究するうえで有用な結節点となる。FOXA3はまた、パイオニア因子としての活性がエンハンサーやプロモーターの利用様式を形作る、リプログラミングおよび分化モデルにおいてマーカーおよび調節因子としても用いられる。

HNF-3γ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FOXA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FOXA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FOXA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FOXA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。