Plasmide Double Nickase (h) HNF-3γ: sc-401720-NIC

FOXA3 code le facteur nucléaire hépatocytaire 3 gamma (HNF-3γ), un facteur de transcription de la famille forkhead/« winged-helix » qui régule l’accessibilité de la chromatine et coordonne des programmes transcriptionnels spécifiques des tissus au cours du développement de l’endoderme. Dans les cellules différenciées, HNF-3γ contribue aux réseaux géniques du foie et de l’épithélium gastro-intestinal qui contrôlent le métabolisme du glucose et des lipides, la gestion des xénobiotiques et la fonction sécrétoire, via des interactions avec les voies des récepteurs nucléaires et des facteurs de transcription hépatocytaires. Une expression altérée de FOXA3 ou un câblage régulateur perturbé a été associé à une homéostasie métabolique dérégulée et à des changements d’état de lignée observés dans des troubles hépatobiliaires et gastro-intestinaux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’identité cellulaire. FOXA3 est également utilisé comme marqueur et modulateur dans des modèles de reprogrammation et de différenciation, où l’activité de facteur pionnier façonne l’utilisation des enhancers et des promoteurs.

HNF-3γ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.