HMGCR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420877-ACT

O Hmgcr de camundongo codifica a 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA redutase (HMGCR), a enzima limitante da via do mevalonato, que converte HMG-CoA em mevalonato e controla a biossíntese celular de colesterol e isoprenoides. Ao regular a disponibilidade de esteróis, a HMGCR influencia a composição de membranas, o metabolismo de lipoproteínas e o controle por retroalimentação da homeostase lipídica por meio de programas transcricionais dependentes de SREBP e da degradação associada ao retículo endoplasmático (ER). O fluxo pela via do mevalonato também sustenta a prenilação de proteínas, impactando a sinalização de pequenas GTPases, o tráfego vesicular e a regulação do crescimento celular. Alterações na atividade da HMGCR e no produto da via do mevalonato são amplamente usadas como pontos de entrada experimentais para estudar mecanismos associados à dislipidemia, inflamação metabólica e modulação, dependente de lipídios, da proliferação e diferenciação celulares.

HMGCR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hmgcr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HMGCR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hmgcr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hmgcr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HMGCR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hmgcr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HMGCR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HMGCR em células tumorais com expressão de Hmgcr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.