Plasmide Double Nickase (m) HMG-1/HMGB1: sc-420871-NIC

Le gène murin **Hmgb1** code la protéine associée à la chromatine **HMG-1/HMGB1**, un facteur architectural se liant à l’ADN, qui courbe et stabilise des complexes nucléoprotéiques afin de moduler la transcription, la réplication, la recombinaison et la réparation de l’ADN. HMGB1 participe au remodelage de la chromatine et aux voies de réponse aux dommages, notamment la coordination de la réparation par excision de bases et la signalisation de réparation des cassures double brin, et peut influencer la signalisation inflammatoire lorsqu’elle est libérée dans le milieu extracellulaire. Une activité dérégulée de HMGB1 a été associée à des réponses cytokiniques aberrantes, à la neuroinflammation et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible fréquente dans les études portant sur l’immunité innée, les réponses au stress et le maintien du génome. Dans des modèles murins, la perturbation de **Hmgb1** est utilisée pour étudier les programmes de mort cellulaire, l’inflammation stérile et le contrôle transcriptionnel dans des contextes pertinents pour le développement et la maladie.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hmgb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hmgb1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hmgb1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hmgb1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.