HM74 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429832-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HM74O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HM74 (m) e o Plasmídeo Double Nickase HM74 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Hcar2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HM74 Anticorpo (D-8): sc-377292
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HM74 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-429832-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene murino Hcar2 codifica o receptor acoplado à proteína G HM74 (também conhecido como GPR109A), um receptor de alta afinidade para a niacina e metabólitos relacionados, que se acopla principalmente à sinalização via Gi. A ativação de HM74 reduz o cAMP intracelular e aciona vias a jusante que influenciam o tônus inflamatório, a quimiotaxia e o metabolismo de lipídios, incluindo a modulação de programas transcricionais ligados ao NF-κB. O receptor é expresso em tipos celulares do sistema imune e associados a barreiras, e tem sido utilizado para estudar a detecção de metabólitos na interface entre dieta, sinais derivados da microbiota e a regulação da imunidade inata. Alterações na sinalização de HM74/Hcar2 têm sido implicadas em modelos de dislipidemia, inflamação relacionada à aterosclerose, patologia semelhante à colite e microambientes imunes associados a tumores, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de imunometabolismo.
HM74 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Hcar2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Hcar2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Hcar2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Hcar2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.