HM74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429832
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HM74 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico HM74, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HM74 Anticorpo (D-8): sc-377292
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HM74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-429832 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Hcar2 codifica o HM74 (também conhecido como GPR109A), um receptor acoplado à proteína G (GPCR) ligado a Gi/o que responde à niacina e a metabólitos endógenos, como o β-hidroxibutirato, para regular a sinalização intracelular de AMPc. Em tecidos imunes e de barreira de camundongos, o HM74 influencia a quimiotaxia, a produção de mediadores inflamatórios e a adaptação metabólica celular por meio de vias dependentes de AMPc e de programas transcricionais a jusante. A atividade do receptor tem sido associada à regulação das respostas de macrófagos e neutrófilos, à homeostase epitelial e a redes de sinalização associadas a lipídios. Assim, a sinalização alterada de Hcar2/HM74 é relevante em modelos de inflamação, estresse metabólico e lesão tecidual, nos quais a comunicação cruzada imunometabólica mediada por GPCR é uma variável-chave.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HM74 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hcar2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hcar2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hcar2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HM74.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hcar2 para a investigação da sinalização de HM74, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hcar2 críticos para a função HM74
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hcar2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo HM74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo HM74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hcar2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo HM74 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR HM74 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hcar2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hcar2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.