HLA-F Double Nickaseプラスミド (h): sc-410821-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HLA-F Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HLA-Fダブルニカースプラスミド（h）およびHLA-Fダブルニカースプラスミド（h2）は、HLA-Fを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HLA-F 抗体 (201A2H): sc-517640
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HLA-F Double Nickaseプラスミド (h) | sc-410821-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-F Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-410821-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-F は、非古典的な MHC クラス I 分子をコードしており、抗原提示細胞とリンパ球受容体（抑制性および活性化型の NK 細胞受容体を含む）との相互作用を調節することで、免疫監視に関与します。高度に多型性を示す古典的 HLA クラス I タンパク質とは異なり、HLA-F は多型が限定的で、免疫寛容の制御、炎症性シグナル伝達、細胞ストレス応答の調節に関与するとされています。HLA-F の発現は活性化した免疫細胞において動的に変化し、抗原提示の状況、自然免疫の活性化閾値、微小環境におけるサイトカイン駆動性経路に影響を及ぼし得ます。HLA-F の発現異常は、炎症性疾患や複数のがんで報告されている免疫回避表現型や免疫細胞浸潤パターンの変化と関連づけられており、機構免疫学研究での活用を支持しています。
HLA-F ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HLA-F 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HLA-F内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HLA-Fの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HLA-Fが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。