HLA-E Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403124-ACT

HLA-E codifica una molecola MHC di classe I non classica che presenta un repertorio peptidico ristretto, includendo peptidi leader provenienti da altre proteine HLA di classe I, per regolare la sorveglianza immunitaria. Sulla superficie cellulare, HLA-E interagisce principalmente con recettori inibitori e attivatori come CD94/NKG2A e CD94/NKG2C sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T, inserendosi nella presentazione dell’antigene e in una segnalazione di tipo “immune checkpoint” che modula le risposte citotossiche. Modellando le soglie di attivazione delle cellule NK e T, HLA-E influenza le risposte a infezione, infiammazione e interazioni tumore–sistema immunitario; inoltre, un’espressione alterata è stata associata a fenotipi di evasione immunitaria in molteplici contesti patologici. La sua regolazione si interseca con vie guidate da citochine, inclusa la segnalazione dell’interferone, che modulano i programmi di processamento e presentazione dell’antigene.

HLA-E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-E senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-E nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-E. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-E nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-E nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-E nelle cellule tumorali con espressione di HLA-E silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.