HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420756

概要

H2-Ab1は、ヒトのHLA-DQB1に機能的に相当するマウスMHCクラスIIβ鎖をコードしており、ヘテロ二量体を形成して細胞外由来のペプチド抗原をCD4陽性T細胞に提示します。この抗原提示の軸は、胸腺での選択、末梢でのT細胞活性化、そしてエンドソーム経路における制御された輸送とペプチドローディングを介した免疫寛容の維持を支えます。H2-Ab1依存的なシグナル伝達はサイトカインプログラムや下流の獲得免疫応答に影響を与え、炎症や自己免疫を形作る機構とも関連します。MHCクラスIIの発現やペプチド提示の制御不全は、マウス疾患モデルにおいて免疫介在性病態への感受性の変化や、抗原特異的免疫応答の多様性と広く関連づけられています。

HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるH2-Ab1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、H2-Ab1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、H2-Ab1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HLA-DQB1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HLA-DQB1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、H2-Ab1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HLA-DQB1の機能に不可欠なH2-Ab1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、H2-Ab1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、H2-Ab1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HLA-DQB1 HDRプラスミド（m）および HLA-DQB1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはH2-Ab1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のH2-Ab1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。