HLA-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401517-ACT

HLA-C codifica uma cadeia pesada clássica do MHC de classe I que forma um heterodímero com a β2-microglobulina para apresentar, na superfície celular, peptídeos processados endogenamente para a vigilância de células T CD8+. Como parte do processamento e apresentação de antígenos, o HLA-C integra contribuições da geração de peptídeos pelo proteassoma, do transporte dependente de TAP para o retículo endoplasmático e do carregamento de peptídeos, moldando a composição do imunopéptidoma. O HLA-C também atua como um ligante-chave para receptores do tipo imunoglobulina de células NK (KIRs), inibitórios e ativadores, influenciando os limiares de reconhecimento imune. A variação alélica e a expressão alterada de HLA-C são amplamente estudadas no contexto de infeções, processos inflamatórios e autoimunes, interações imunes no cancro e compatibilidade em transplantes.

HLA-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-C em células tumorais com expressão de HLA-C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.