Histone H1X Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411232

Visão geral

H1FX codifica a histona H1X, uma variante de histona ligante H1 independente de replicação que se liga ao DNA nucleossômico e contribui para a compactação da cromatina em níveis superiores e para a organização do genoma. Ao modular a acessibilidade da cromatina, a H1X influencia programas transcricionais, o timing de replicação do DNA e a coordenação dos processos de deteção e reparo de danos no DNA. Alterações na composição das histonas ligantes podem deslocar estados epigenéticos e impactar vias que regulam o controlo do ciclo celular, a diferenciação e respostas ao stress. A desregulação da arquitetura da cromatina e do equilíbrio de variantes de histonas é frequentemente observada no cancro e noutras doenças com instabilidade epigenómica, tornando o H1FX um nó útil para estudos mecanísticos das relações estrutura–função no núcleo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Histone H1X (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene H1FX em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do H1FX, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do H1FX na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Histone H1X.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de H1FX para a investigação da sinalização de Histone H1X, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) H1FX críticos para a função Histone H1X
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos H1FX para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Histone H1X Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Histone H1X Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus H1FX. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Histone H1X Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Histone H1X (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia H1FX para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo H1FX definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.