Histone H1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411232

概要

H1FXはヒストンH1Xをコードしており、ヒストンH1Xは複製非依存性のリンカーヒストン変異体としてヌクレオソームDNAに結合し、高次クロマチンの凝縮およびゲノム構造の形成に寄与します。クロマチンのアクセス性を調節することで、H1Xは転写プログラム、DNA複製のタイミング、ならびにDNA損傷の検知と修復過程の連携に影響を与えます。リンカーヒストンの組成が変化すると、エピジェネティック状態がシフトし、細胞周期制御、分化、ストレス応答を司る経路に影響を及ぼし得ます。クロマチン構築とヒストン変異体のバランスの破綻は、エピゲノム不安定性を伴うがんやその他の疾患でしばしば観察されるため、H1FXは核内の構造—機能関係の機構研究において有用な結節点となります。

Histone H1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるH1FX遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、H1FX内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、H1FXのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Histone H1Xタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Histone H1Xシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、H1FX欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Histone H1Xの機能に不可欠なH1FXエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、H1FXゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Histone H1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHistone H1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、H1FX遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Histone H1X HDRプラスミド（h）および Histone H1X HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはH1FXホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のH1FX標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。