Histone H1X CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411232-ACT

H1FXは、ヌクレオソームDNAに結合し、高次のクロマチン凝縮およびゲノム構造の形成に寄与するリンカーヒストンのバリアントであるヒストンH1Xをコードします。ヒストンH1Xは、ヌクレオソーム間隔やクロマチンのアクセス性を調節することで、クロマチンリモデリング経路を介した転写制御、DNA複製タイミング、DNA損傷応答に影響を与えます。H1FXの発現変化、あるいはヒストンH1バリアント間のバランス変化は、細胞状態の遷移、増殖プログラム、ゲノム安定性に影響し得るエピジェネティックな制御異常と関連してきました。これらの特性により、H1FXはヒト細胞におけるクロマチン構築、転写ネットワーク、疾患関連のエピジェネティック機構を研究するうえで有用な標的となります。

Histone H1X CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性H1FXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Histone H1X CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における H1FX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はH1FX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Histone H1Xの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のH1FX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHistone H1X依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびH1FX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHistone H1X経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。