Histone H1⁰ Plasmide Double Nickase (h): sc-403716-NIC

H1F0 codifica la variante dell’istone linker indipendente dalla replicazione Istone H10, che si lega al DNA in ingresso/uscita dal nucleosoma per stabilizzare la struttura della cromatina di ordine superiore e modulare l’accessibilità del genoma. Il suo accumulo è comunemente associato alla differenziazione cellulare e a un ridotto potenziale proliferativo, riflettendo ruoli nella compattazione della cromatina, nella regolazione trascrizionale e nel mantenimento dello stato epigenetico. Modulando la spaziatura dei nucleosomi e le proprietà fisiche della cromatina, l’Istone H10 influenza processi quali la tempistica di replicazione del DNA, le risposte al danno del DNA e i programmi globali di espressione genica. Alterazioni dell’espressione di H1F0 e dell’organizzazione della cromatina sono state riportate in diversi contesti della biologia dei tumori e della specificazione di linea cellulare, a supporto del suo impiego come marcatore e nodo meccanicistico negli studi di disregolazione epigenetica.

Histone H10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus H1F0 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di H1F0. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di H1F0. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con H1F0 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.