Histone H1⁰ Double Nickaseプラスミド (h): sc-403716-NIC

H1F0 は、複製非依存性のリンカーヒストン変異体である Histone H10 をコードしており、ヌクレオソームの侵入／退出部位の DNA に結合して高次クロマチン構造を安定化し、ゲノムのアクセス性を調節します。Histone H10 の蓄積は一般に細胞分化および増殖能の低下と関連しており、クロマチンの凝縮、転写制御、エピジェネティック状態の維持における役割を反映しています。ヌクレオソーム間隔やクロマチンの物理的性質を調節することで、Histone H10 は DNA 複製タイミング、DNA 損傷応答、全体的な遺伝子発現プログラムなどの過程に影響を及ぼします。腫瘍生物学や系譜（リネージ）決定の文脈において H1F0 発現とクロマチン組織の変化が報告されており、エピジェネティックな破綻を研究する上でのマーカー、ならびに機構的な結節点としての有用性が支持されています。

Histone H10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における H1F0 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、H1F0内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、H1F0の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、H1F0が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。