Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Histamine H3 Receptor Double Nickase Plasmid (h): sc-402473-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Histamine H3 Receptor Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Histamine H3 Receptor Double-Nickase-Plasmid (h) und Histamine H3 Receptor Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HRH3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Histamine H3 Receptor: sc-390140
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Histamine H3 Receptor Double Nickase Plasmid (h) | sc-402473-NIC | 20 µg | $410.00 |
HRH3 kodiert den Histamin-H3-Rezeptor, einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der im zentralen Nervensystem stark angereichert ist und hauptsächlich als präsynaptischer Autorezeptor und Heterorezeptor fungiert, um die Freisetzung von Neurotransmittern zu regulieren. Nach Bindung von Histamin hemmt die HRH3-Signalübertragung die Adenylatcyclase, wodurch die cAMP/PKA-Aktivität sinkt, und moduliert die Leitfähigkeit von Ionenkanälen sowie nachgeschaltete MAPK/ERK-Signalwege, was neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität mitprägt. Über die Kontrolle des histaminergen Tonus und die Wechselwirkungen mit dopaminergen, cholinergen und noradrenergen Schaltkreisen trägt HRH3 zur Schlaf-Wach-Regulation, Kognition und appetitbezogenen Neurobiologie bei. Eine veränderte HRH3-Expression oder -Signalübertragung wurde im Zusammenhang mit neurologischen und neuropsychiatrischen Krankheitsmechanismen untersucht, was seine Eignung als Ziel für Forschung auf Signalweg- und Schaltkreisebene unterstreicht.
Histamine H3 Receptor Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HRH3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HRH3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HRH3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HRH3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.