CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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Histamine H3 Receptor Double Nickaseプラスミド (h): sc-402473-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Histamine H3 Receptor Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Histamine H3 Receptorダブルニカースプラスミド（h）およびHistamine H3 Receptorダブルニカースプラスミド（h2）は、HRH3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Histamine H3 Receptor 抗体 (D-5): sc-390140
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Histamine H3 Receptor Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402473-NIC | 20 µg | $410.00 |
HRH3 はヒスタミン H3 受容体をコードしており、中枢神経系に豊富に発現する Gi/o 共役型の GPCR である。主にシナプス前自己受容体およびヘテロ受容体として機能し、神経伝達物質の放出を調節する。ヒスタミンが結合すると、HRH3 シグナルはアデニル酸シクラーゼを抑制して cAMP/PKA 活性を低下させるとともに、イオンチャネルのコンダクタンスや下流の MAPK/ERK 経路を調節し、神経細胞の興奮性とシナプス可塑性を形作る。ヒスタミン作動性トーンの制御と、ドパミン作動性・コリン作動性・ノルアドレナリン作動性回路とのクロストークを通じて、HRH3 は睡眠—覚醒調節、認知、食欲に関連する神経生物学に寄与する。HRH3 の発現やシグナル伝達の変化は、神経疾患および神経精神疾患の機序との関連で研究されており、経路および回路レベルの研究標的としての有用性が支持されている。
Histamine H3 Receptor ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HRH3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HRH3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HRH3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HRH3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。