Histamine H3 Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402473-ACT

HRH3 codifica o recetor de histamina H3, um GPCR acoplado a Gi/o expresso predominantemente no sistema nervoso, onde atua como autorrecetor e heterorrecetor para modular a libertação de neurotransmissores. Após a ligação da histamina, a sinalização de HRH3 reduz o cAMP intracelular, influencia a atividade de canais iónicos e molda a transmissão sináptica em vias que regulam a vigília, a cognição e o apetite. Por meio de interações (cross-talk) com outros sistemas neuromoduladores, HRH3 contribui para o controlo do tónus dopaminérgico, colinérgico e serotoninérgico em circuitos neuronais. Alterações na expressão ou na sinalização de HRH3 têm sido investigadas no contexto da biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, da regulação do ciclo sono–vigília e de fenótipos metabólicos.

Histamine H3 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HRH3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histamine H3 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HRH3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HRH3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histamine H3 Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HRH3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histamine H3 Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histamine H3 Receptor em células tumorais com expressão de HRH3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.