HIF1a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400036-ACT

O HIF1A codifica o fator induzível por hipóxia 1 alfa (HIF1a), um fator de transcrição sensível ao oxigênio que coordena a adaptação celular a baixas tensões de oxigênio. Após sua estabilização, o HIF1a dimeriza com o ARNT (HIF-1β) e se liga a elementos de resposta à hipóxia para regular genes que controlam a glicólise, a sinalização angiogênica, a eritropoiese, a homeostase do pH e a sobrevivência celular. Esse programa de detecção de oxigênio interage com a sinalização PI3K–AKT–mTOR, o metabolismo mitocondrial e vias de redox, moldando estados inflamatórios e de células imunes, bem como a remodelação estromal. A atividade desregulada de HIF1A está associada a respostas a lesões isquêmicas, inflamação crônica e à biologia do microambiente tumoral, tornando-o um nó central para estudos mecanísticos de fenótipos induzidos por hipóxia.

HIF1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIF1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HIF1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIF1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIF1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HIF1a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIF1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HIF1a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HIF1a em células tumorais com expressão de HIF1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.