HIF PHD2 Double Nickase Plasmid (m): sc-431081-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HIF PHD2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HIF PHD2 Double-Nickase-Plasmid (m) und HIF PHD2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Egln1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HIF PHD2: sc-271835
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HIF PHD2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431081-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Egln1** kodiert die HIF-Prolylhydroxylase 2 (HIF PHD2), eine 2‑Oxoglutarat-/Fe(II)-abhängige Dioxygenase, die unter Normoxie HIF‑α‑Untereinheiten hydroxylisiert und dadurch die VHL‑vermittelte Ubiquitinierung sowie den proteasomalen Abbau fördert. Indem sie die Sauerstoff-Schwelle der Sensorik festlegt, steuert HIF PHD2 hypoxieinduzierbare Transkriptionsprogramme, die Angiogenese, Erythropoese, Stoffwechsel und Zellüberleben kontrollieren. Die Aktivität von Egln1 greift in die HIF‑1/2‑Signalübertragung, die Verfügbarkeit TCA‑Zyklus‑gekoppelter Metaboliten und den Redoxzustand ein und ist damit zentral für adaptive Antworten auf Veränderungen des Sauerstoffpartialdrucks. Eine Fehlregulation dieser Achse ist relevant für Erkrankungen mit gestörter Hypoxiesignalisierung, darunter Gefäßumbau, Erythrozytose‑Phänotypen, ischämiebedingte Gewebereaktionen und die Biologie des Tumormikromilieus.
HIF PHD2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Egln1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Egln1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Egln1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Egln1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.