Hic-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402786

概要

TGFB1I1 は、インテグリン依存的シグナル伝達と機械的ストレスに対する転写応答を協調させる、フォーカルアドヒージョンおよび核内の LIM ドメインアダプターである Hic-5 をコードします。Hic-5 は、アクチン細胞骨格の再構築、接着のターンオーバー、Rho ファミリー GTPase シグナル伝達に関与するタンパク質複合体の足場として機能し、細胞の伸展、遊走、細胞外マトリックスとの相互作用に影響を与えます。また、線維化や上皮間葉転換（EMT）様の表現型を形作る TGF-β 応答性プログラムおよび関連経路とも連携します。Hic-5 活性の異常は、複数の疾患関連コンテキストにおける間質リモデリングの変化や侵襲的な細胞挙動と関連づけられており、ヒト細胞モデルにおけるメカノトランスダクションおよび転写共調節の標的としての利用を支持します。

Hic-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTGFB1I1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TGFB1I1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TGFB1I1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hic-5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hic-5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TGFB1I1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hic-5の機能に不可欠なTGFB1I1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TGFB1I1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hic-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHic-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TGFB1I1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hic-5 HDRプラスミド（h）および Hic-5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTGFB1I1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTGFB1I1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。