Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Hec1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406844
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hec1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Hec1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hec1 Antibody (C-11): sc-515550
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hec1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406844 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
NDC80 codifica Hec1, un componente essenziale del cinetocore esterno che forma il complesso NDC80 e collega direttamente i microtubuli del fuso ai cromosomi durante la mitosi. Hec1 coordina l’allineamento (congressione) e la segregazione dei cromosomi sostenendo attacchi end-on stabili dei microtubuli e contribuendo alla segnalazione del checkpoint di assemblaggio del fuso (SAC), mantenendo così l’integrità del genoma. L’alterazione o la deregolazione di Hec1 perturba la progressione mitotica, aumenta l’instabilità cromosomica e si interseca con le vie che controllano l’aneuploidia e i checkpoint del ciclo cellulare. Questi processi sono spesso analizzati in studi sui disturbi proliferativi e sulla biologia delle cellule tumorali, in cui la funzione del cinetocore e la fedeltà mitotica risultano compromesse.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NDC80 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NDC80 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NDC80 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hec1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NDC80 per lo studio della segnalazione di Hec1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni NDC80 critici per la funzione di Hec1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NDC80 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Hec1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Hec1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NDC80. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Hec1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Hec1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NDC80 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NDC80 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.