Hec1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406844

Übersicht

NDC80 kodiert Hec1, eine essenzielle Komponente des äußeren Kinetochors, die den NDC80‑Komplex bildet und während der Mitose Spindel‑Mikrotubuli direkt mit den Chromosomen koppelt. Hec1 koordiniert die Ausrichtung (Kongression) und Segregation der Chromosomen, indem es stabile endständige Mikrotubuli‑Anheftungen unterstützt und zur Signalübertragung des Spindel‑Assembly‑Checkpoints beiträgt, wodurch die Genomintegrität erhalten bleibt. Eine Störung oder Fehlregulation von Hec1 beeinträchtigt den Mitoseverlauf, erhöht die chromosomale Instabilität und greift in Signalwege ein, die Aneuploidie und Zellzyklus‑Checkpoints kontrollieren. Diese Prozesse werden häufig in Studien zu proliferativen Erkrankungen und zur Tumorzellbiologie untersucht, in denen Kinetochorfunktion und mitotische Genauigkeit verändert sind.

Das Hec1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NDC80-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NDC80-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NDC80 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hec1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NDC80-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hec1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NDC80-Exone abzielen, die für die Hec1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NDC80-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hec1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Hec1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NDC80-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hec1 HDR-Plasmid (h) und Hec1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NDC80-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NDC80-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.