HEATR5B CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-412293-ACT-2

ヒトのHEATR5Bは、HEATリピートを含むタンパク質をコードしており、多タンパク質複合体の編成を担う足場因子として機能し、細胞内輸送や細胞骨格と連動した過程を支えると予測されている。HEATリピートタンパク質の既知の役割に基づけば、HEATR5Bは核—細胞質間輸送、タンパク質複合体の動態、ストレス応答性の遺伝子発現制御に影響し、その下流で細胞増殖や分化経路にも作用すると考えられる。HEATR5Bの活性や発現の変化は、輸送恒常性の破綻や異常シグナル伝達を伴う病的機序に関与し得るため、ヒト疾患における複雑な細胞機能障害の研究において重要な対象となる。さらに、HEATR5Bの遺伝子編集は、相互作用ネットワーク（インタラクトーム）のマッピング、細胞内局在の同定、トランスクリプトームおよびプロテオーム解析による経路レベルの表現型評価を行うためのノックアウト細胞やタグ付け細胞モデルの作製に有用である。

HEATR5B CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HEATR5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HEATR5B CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における HEATR5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHEATR5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HEATR5Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHEATR5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHEATR5B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHEATR5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHEATR5B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。