HE4 Lentiviral Activation Particles (m): sc-426693-LAC

Wfdc2 kodiert HE4, einen sekretorischen Proteaseinhibitor mit Whey-Acidic-Protein-(WAP)-Domäne, der mit epithelialer Differenzierung, der Regulation extrazellulärer Proteasen und dem Umbau der lokalen Gewebemikroumgebung in Verbindung gebracht wird. In Mausmodellen ist die HE4-Expression mit der Biologie epithelialer Barrieren sowie mit entzündungs- und kontextabhängigen Programmen verknüpft, die Zell-Zell-Adhäsion und die Dynamik der extrazellulären Matrix prägen. Durch die Modulation von Proteolyse und proteaseaktivierten Signalkaskaden kann HE4 Prozesse wie Migration, invasionsähnliches Verhalten in vitro und stressresponsive Transkriptionszustände beeinflussen. Eine veränderte Regulation von WFDC2/HE4 wird in der krebs- und entzündungsorientierten Forschung als molekularer Korrelatmarker genutzt und unterstreicht damit die Relevanz für mechanistische Studien zur epithelialen Pathophysiologie.

HE4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Wfdc2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HE4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Wfdc2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HE4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Wfdc2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.