Hck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420810

Visão geral

O gene Hck de camundongo codifica a quinase de células hematopoéticas (hematopoietic cell kinase), uma tirosina quinase não receptora da família Src, enriquecida em linhagens mieloides, que conecta sinais de imunorreceptores e integrinas a redes de fosforilação a jusante. A Hck participa de vias ligadas a receptores Fc e a receptores do tipo Toll (TLR) que coordenam a remodelação do citoesqueleto, a fagocitose, a desgranulação e a produção de mediadores inflamatórios, convergindo em nós como PI3K/AKT, MAPK e NF-κB. Alterações na atividade de Hck têm sido associadas à desregulação da sinalização imune inata e a comportamento aberrante de células mieloides em condições inflamatórias e em modelos de leucemia. Como uma quinase de sinalização proximal, a Hck é amplamente utilizada para investigar mecanismos que controlam a ativação, a adesão e a migração de macrófagos e neutrófilos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Hck (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hck em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hck, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hck na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Hck.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hck para a investigação da sinalização de Hck, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hck críticos para a função Hck
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hck para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Hck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Hck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hck. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Hck Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Hck (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hck para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hck definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.