Hck CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401507-ACT

ヒトのHCKは、Srcファミリーに属する受容体非依存性チロシンキナーゼであるHckをコードしており、主として骨髄系細胞系列で発現する。Hckは免疫受容体およびインテグリン由来のシグナルを下流のリン酸化カスケードへと結び付ける。Hckは、PI3K–AKT、MAPK/ERK、STATシグナルと交差する経路を介して、細胞骨格リモデリング、接着、走化性、貪食、ならびに炎症性メディエーター産生を制御する。造血・免疫の文脈では、Hck活性の破綻が自然免疫応答の変調や、白血病およびその他の炎症関連病態で観察される異常なシグナル伝達ネットワークと関連付けられている。受容体駆動型シグナル伝達における近位キナーゼとして、HCKは骨髄系細胞における刺激依存的なリン酸化プログラムやフィードバック制御を解析する目的で、しばしば研究対象となっている。

Hck CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HCKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Hck CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HCK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHCK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Hckの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHCK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHck依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHCK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHck経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。