HCF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403097-ACT

HCFC1 は、クロマチンに結合する転写共制御因子である host cell factor 1（HCF1）をコードしており、細胞周期の進行および系譜特異的な遺伝子発現を統合的に調節します。HCF1 は、配列特異的転写因子を、ヒストン修飾複合体を含むエピジェネティック／転写制御機構へと橋渡しすることで、プロモーター活性やクロマチン状態を調整します。これらの相互作用を通じて、HCF1 は G1/S 移行、複製に伴う転写プログラム、代謝関連遺伝子の制御などの過程に影響します。HCFC1 の制御異常や病原性変異は、神経発達に関わる表現型や転写制御の変調と関連づけられており、ヒト疾患モデルにおける遺伝子制御機構の研究対象としての重要性が示されています。

HCF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HCFC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HCF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HCFC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHCFC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HCF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHCFC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHCF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHCFC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHCF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。