Hbb-y Double Nickase Plasmid (m): sc-420805-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Hbb-y Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Hbb-y Double-Nickase-Plasmid (m) und Hbb-y Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Hbb-y abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Hbb-y Double Nickase Plasmid (m) | sc-420805-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hbb-y Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420805-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hbb-y kodiert eine maus-spezifische β‑globinähnliche Untereinheit, die zur Assemblierung des Hämoglobin-Tetramers und zum Sauerstofftransport in erythroiden Zellen beiträgt. Die Expression wird während der Erythropoese durch Kontrollmechanismen des Globin-Lokus streng reguliert und ist mit der Hämbiosynthese, dem Eisenstoffwechsel und der Redoxhomöostase verknüpft, um die Funktion roter Blutkörperchen aufrechtzuerhalten. Variationen in β‑Globin-Genen können die Stabilität des Hämoglobins und seine Sauerstoffaffinität beeinträchtigen und bieten damit ein genetisch gut zugängliches Modell zur Untersuchung anämiebezogener Phänotypen und von Stressantworten in Erythrozyten. Als Teil des übergeordneten Hämoglobin-Pathways ist Hbb-y für Studien zur hämatopoetischen Differenzierung, zur Anpassung an Hypoxie und zu Hämoglobinopathien in Mausmodellen relevant.
Hbb-y Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Hbb-y-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Hbb-y abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Hbb-y-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Hbb-y-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.