G_γ13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403045-ACT

GNG13 codifica a subunidade gama humana da proteína G, Gγ13, um componente de complexos heterotriméricos de proteínas G que acoplam GPCRs ativados a vias efetoras a jusante. Como parte do dímero Gβγ, a Gγ13 ajuda a regular a propagação do sinal para alvos como a fosfolipase Cβ e canais iônicos, modulando saídas de segundos mensageiros, incluindo o fluxo de cálcio e respostas de MAPK/ERK. A expressão de GNG13 é enriquecida em contextos associados aos sentidos, sustentando papéis na quimiossensação e na sinalização neuronal, em que é necessário um acoplamento preciso de GPCRs. A expressão desregulada de subunidades de proteína G ou o remodelamento de vias de GPCR é frequentemente observado em câncer e em estados relevantes para a neurobiologia, tornando o GNG13 útil para estudos mecanísticos de plasticidade de sinalização e controle do estado celular.

Gγ13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNG13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gγ13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNG13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNG13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gγ13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNG13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gγ13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gγ13 em células tumorais com expressão de GNG13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.