G_{β 5} CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420611

概要

Gnb5はGβ5サブユニットをコードしている。Gβ5は非典型的なGタンパク質β成分であり、R7ファミリーのRGSタンパク質と必須の複合体を形成して、GαのGTP加水分解を促進し、GPCRシグナルの終結をより鋭敏にする。マウス細胞では、Gβ5–RGS複合体が神経伝達物質受容体や感覚受容体の下流にあるcAMPおよびCa²⁺関連シグナルの速度論と振幅を調節し、神経細胞の興奮性やシナプス伝達を形作っている。GPCR駆動経路の制御を通じて、Gβ5は神経調節や刺激適応など、ネットワークレベルのシグナル伝達過程にも影響を与える。GNB5関連シグナルの破綻は神経発達および感覚に関わる表現型と関連づけられており、GPCRのタイミング機構や神経回路機能のメカニズム研究における重要性を支持している。

Gβ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGnb5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gnb5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gnb5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gβ 5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gβ 5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gnb5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gβ 5の機能に不可欠なGnb5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gnb5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gβ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGβ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gnb5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gβ 5 HDRプラスミド（m）および Gβ 5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGnb5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGnb5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。