Gα i-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400568-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα i-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα i-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα i-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAI2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gα i-2: sc-13534
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα i-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα i-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAI2 kodiert die humane heterotrimere G‑Protein‑Alpha‑Untereinheit Gαi‑2, einen GDP/GTP‑regulierten Signaltransducer, der aktivierte GPCRs mit der Hemmung der Adenylylcyclase und einer verminderten cAMP‑Produktion koppelt. Durch die Einbindung in GPCR‑abhängige Signalwege prägt Gαi‑2 die PKA‑Signalübertragung, die Regulation von Ionenkanälen, MAPK‑Antworten und PI3K‑abhängige Prozesse und beeinflusst damit Chemotaxis, Sekretion und proliferative Antworten in verschiedenen Zelltypen. Die Aktivität von GNAI2 ist zudem über Gβγ‑Signale sowie GRK/β‑Arrestin‑Netzwerke in Rezeptordesensibilisierung und -trafficking integriert und trägt so zur Festlegung von Signalstärke und -dauer bei. Eine dysregulierte Gαi‑2‑Signalgebung wurde mit veränderter Migration von Immunzellen und aberranten Kontexten von Wachstumssignalen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Mechanismen rund um Entzündung und Onkogenese unterstützt, ohne eine klinische Nutzbarkeit zu implizieren.
Gα i-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAI2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAI2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAI2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAI2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.