Plásmido CRISPR de Activación (h) G_{α 14}: sc-404556-ACT

GNA14 codifica la subunidad alfa Gα14 de la proteína G heterotrimérica humana, un miembro de la familia Gq/11 que acopla los GPCR activados a la señalización de la fosfolipasa C-β. Tras la unión del receptor, Gα14 promueve la hidrólisis de PIP2 para generar IP3 y DAG, lo que impulsa la movilización de Ca2+ intracelular, la activación de la proteína quinasa C y programas transcripcionales posteriores vinculados a la secreción, la contracción del músculo liso y la señalización de células inmunitarias. Este eje intersecta con las vías de MAPK y de GTPasas Rho, que coordinan la proliferación, la remodelación del citoesqueleto y la migración celular. La señalización desregulada GPCR–Gq en la que participa GNA14 se ha asociado con estados de señalización alterados en contextos proliferativos e inflamatorios, lo que respalda su estudio en modelos celulares relevantes para enfermedades.

Gα 14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNA14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gα 14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNA14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNA14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gα 14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNA14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gα 14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gα 14 en células tumorales con expresión de GNA14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.