Plasmide Double Nickase (h) GSDMDC1: sc-406596-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GSDMDC1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GSDMDC1 Double Nickase (h) et le plasmide GSDMDC1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GSDMD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GSDMDC1 Antibody (H-11): sc-393581
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GSDMDC1 | sc-406596-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GSDMDC1 | sc-406596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSDMD code la gasdermine D, un effecteur formant des pores qui est activé par protéolyse en aval de la signalisation des inflammasomes et du clivage par les caspases-1/4/5/11 pour exécuter la mort cellulaire pyroptotique. Lors de l’activation, le fragment N-terminal s’oligomérise dans la membrane plasmique pour former des pores qui entraînent des flux ioniques, un gonflement cellulaire et la libération de médiateurs pro-inflammatoires tels que les cytokines de la famille de l’IL-1, reliant la détection immunitaire innée à des issues inflammatoires. Cette voie croise la signalisation des récepteurs de reconnaissance de motifs, l’amorçage par NF-κB et l’activation non canonique des inflammasomes, modulant la défense antimicrobienne et l’inflammation stérile. Une activité dérégulée de la gasdermine D est impliquée dans la biologie des maladies inflammatoires et infectieuses, et elle est largement étudiée dans les cellules myéloïdes, les barrières épithéliales et les microenvironnements tumoraux immunitaires.
GSDMDC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSDMD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSDMD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSDMD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSDMD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.