GS1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405996-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GS1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GS1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GS1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PUDP. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GS1 Anticorpo (B-4): sc-166043
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GS1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405996-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GS1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405996-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O PUDP humano codifica a pseudouridina-5′-fosfatase (GS1), uma enzima da rede de salvamento de nucleosídeos pirimidínicos que desfosforila o monofosfato de pseudouridina em pseudouridina, sustentando a homeostase de nucleotídeos e o turnover de RNA. Essa atividade conecta o catabolismo de modificações de RNA ao metabolismo central do carbono ao canalizar ribose-1-fosfato e intermediários relacionados para vias metabólicas mais amplas. A função alterada de PUDP/GS1 pode perturbar o equilíbrio de nucleotídeos e o estado metabólico celular, processos frequentemente associados ao estresse proliferativo e a programas de manutenção do genoma. Por isso, o PUDP é de interesse para estudos mecanísticos do metabolismo de modificações de RNA, adaptação ao estresse e reconfiguração de vias em modelos celulares relevantes para doenças.
GS1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PUDP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PUDP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PUDP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PUDP interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.