GRHL2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-434250-ACT

Grhl2 は、上皮分化、頂端—基底極性、ならびにバリア形成を制御する Grainyhead-like（Grainyhead 様）転写因子 GRHL2 をマウスでコードする遺伝子である。GRHL2 は、接着結合（adherens junction）の組み立て、タイトジャンクションの完全性、重層上皮の発生に関わる遺伝子プログラムを統合的に制御し、細胞—細胞接着を増殖および組織形態形成と結び付けている。多様なモデル系において、GRHL2 活性の変化は、上皮—間葉系の可塑性に関連する過程、創傷修復、器官形成などを含む、上皮状態遷移の異常な制御と関連付けられてきた。これらの機能により、Grhl2 は上皮系譜の運命決定や、上皮の恒常性および疾患に伴うリモデリングに影響する経路を研究するうえで有用な解析ノードとなる。

GRHL2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Grhl2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GRHL2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Grhl2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGrhl2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GRHL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGrhl2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGRHL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGrhl2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGRHL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。