Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GRASP65 Double Nickase Plasmid (h): sc-402436-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GRASP65 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GRASP65 Double-Nickase-Plasmid (h) und GRASP65 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GORASP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GRASP65: sc-374423
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GRASP65 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRASP65 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GORASP1 kodiert GRASP65, ein peripheres Membranprotein des Golgi-Apparats, das zur Aufrechterhaltung der Architektur der Golgi-Stapel beiträgt und durch regulierte Oligomerisierung sowie Interaktionen mit Golginen und Vesikel-Tethering-Faktoren die Stapelung der Zisternen und die Bildung des Golgi-Bandes unterstützt. GRASP65 trägt zur Wiederassemblierung des Golgi nach der Mitose bei und ist am Membrantransport und an der Proteinsortierung entlang des sekretorischen Weges beteiligt, wobei es die glykosylierungsabhängige Verarbeitung von Frachtproteinen beeinflusst. Seine phosphorylierungsabhängige Dynamik koppelt die Golgi-Organisation an die Zellzyklusprogression und an Stressantworten, die sekretorische Kompartimente umgestalten. Veränderte Golgi-Struktur und Trafficking-Programme unter Beteiligung von GRASP65 wurden mit pathologischen Zuständen in Verbindung gebracht, die durch gestörte Proteostase und abnorme Sekretion gekennzeichnet sind, darunter Neurodegeneration und krebsbezogene Zellbiologie.
GRASP65 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GORASP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GORASP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GORASP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GORASP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.