GRAMD1C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412329

Visão geral

GRAMD1C (GRAM domain containing 1C) codifica uma proteína de transferência de lipídios ancorada ao retículo endoplasmático, implicada no transporte não vesicular de esteróis e na homeostase intracelular do colesterol. Por meio de um mecanismo de detecção de membranas dependente do seu domínio GRAM e de sua interação com membranas ricas em lipídios, a GRAMD1C está associada à biologia dos sítios de contato entre o RE e outras organelas e à regulação da composição lipídica das membranas. Esses processos se conectam a vias que governam a função mitocondrial, a autofagia/mitofagia e o metabolismo energético celular, tornando a GRAMD1C um ponto útil para estudar a comunicação entre organelas mediada por lipídios. Alterações na expressão ou na função de GRAMD1C têm sido investigadas no contexto de fenótipos metabólicos e de estados celulares associados ao câncer, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos do metabolismo lipídico em modelos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GRAMD1C (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GRAMD1C em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GRAMD1C, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GRAMD1C na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GRAMD1C.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GRAMD1C para a investigação da sinalização de GRAMD1C, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GRAMD1C críticos para a função GRAMD1C
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GRAMD1C para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GRAMD1C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GRAMD1C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GRAMD1C. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GRAMD1C Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GRAMD1C (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GRAMD1C para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GRAMD1C definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.