GRAMD1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408929

Visão geral

GRAMD1B (GRAM domain-containing 1B) é uma proteína de transferência de colesterol ancorada no RE (retículo endoplasmático) que participa do transporte não vesicular de lipídios em sítios de contato entre o retículo endoplasmático e a membrana plasmática. Ao ligar-se ao colesterol acessível por meio do seu domínio semelhante a StART e ao responder a sinais de fosfoinositídeos na membrana plasmática, a GRAMD1B contribui para a homeostase do colesterol, a organização de membranas e a sinalização dependente de lipídios. Esses processos se relacionam com a detecção de esteróis, as respostas ao estresse do RE e uma regulação metabólica mais ampla que influencia programas de crescimento e sobrevivência celular. Alterações na expressão ou na atividade de GRAMD1B têm sido investigadas em contextos de metabolismo lipídico desregulado e de sinalização associada ao câncer, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de biologia de membranas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GRAMD1B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GRAMD1B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GRAMD1B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GRAMD1B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GRAMD1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GRAMD1B para a investigação da sinalização de GRAMD1B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GRAMD1B críticos para a função GRAMD1B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GRAMD1B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GRAMD1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GRAMD1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GRAMD1B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GRAMD1B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GRAMD1B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GRAMD1B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GRAMD1B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.