GRAMD1A Double Nickaseプラスミド (h): sc-408934-NIC

GRAMD1A は、GRAM ドメインを含む脂質輸送タンパク質をコードしており、小胞体―形質膜の接触部位に局在します。そこで非小胞性のコレステロール輸送と膜脂質恒常性の維持に寄与します。利用可能なコレステロールを感知しつつステロール移動を協調させることで、GRAMD1A は膜組成、シグナル伝達能、オルガネラ間コミュニケーションを支え、脂質の利用可能性を細胞ストレス応答へと結び付けます。これらの過程は、膜トラフィッキング、代謝適応、コレステロール依存性のシグナル伝達マイクロドメインを制御する経路と交差します。コレステロールの取り扱いおよび接触部位の生物学の破綻は、心代謝形質や腫瘍細胞における膜リモデリングとしばしば関連するため、GRAMD1A は脂質駆動性フェノタイプの機序研究に有用な結節点となります。

GRAMD1A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRAMD1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRAMD1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRAMD1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRAMD1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。