GPR55 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432690

Übersicht

Das Mausgen *Gpr55* kodiert GPR55, einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der im endocannabinoidbezogenen Signalnetzwerk intensiv untersucht wird und auf Lipidmediatoren wie Lysophosphatidylinositol reagiert. GPR55 koppelt an Gα12/13 und Gαq sowie an die nachgeschalteten RhoA‑ROCK‑ und PLCβ‑Ca2+-Signalwege und beeinflusst dadurch Zytoskelett‑Remodellierung, Migration und Transkriptionsprogramme einschließlich der MAPK/ERK‑Signalübertragung. In immunologischen und stromalen Kontexten wurde die GPR55‑Aktivität mit der Modulation entzündlicher Signalwege, dem Gleichgewicht von Osteoklasten und Osteoblasten sowie der neuronalen Erregbarkeit in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte GPR55‑assoziierte Signalgebung wurde in Modellen für Schmerz, metabolische Phänotypen, Knochenerkrankungen und entzündungsassoziiertes Gewebe‑Remodelling untersucht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in der GPCR‑Signalwegforschung unterstützt.

Das GPR55 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gpr55-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gpr55-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gpr55 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR55-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gpr55-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR55-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gpr55-Exone abzielen, die für die GPR55-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gpr55-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR55 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GPR55 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gpr55-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR55 HDR-Plasmid (m) und GPR55 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gpr55-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gpr55-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.