GPR116 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408424-ACT

ADGRF5（GPR116）は、大きな細胞外N末端領域とGPCRプロテアーゼ切断部位を有する接着型Gタンパク質共役受容体であり、細胞外マトリックスおよび細胞間相互作用を細胞内シグナル伝達へと結び付ける。肺を含む上皮・内皮コンパートメントで発現し、cAMP/PKA経路やRho GTPaseシグナルなどのGPCR媒介性経路を介して、組織恒常性やバリア関連プロセスに寄与する。GPR116はサーファクタントの恒常性と肺胞機能の調節に関与するとされ、呼吸器組織における炎症性リモデリングや線維化反応には、その発現変化が関連すると報告されている。さらにADGRF5の発現制御異常は複数のがんトランスクリプトームデータセットでも示されており、腫瘍—微小環境相互作用、接着シグナル、細胞遊走に関する研究での活用が支持されている。

GPR116 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADGRF5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR116 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADGRF5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADGRF5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR116の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADGRF5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR116依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADGRF5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR116経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。